臨床基因擴增實驗又稱PCR實驗,是專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內所含的基因進行擴增的方法,測出一些病毒含量不高的感染者體內是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測出的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優點,因此被臨床醫生廣為認可,已廣泛應用于醫院的臨床診斷和各防疫檢測部門的禽疫病診斷。
但是,這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規范的操作為前提。
近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室(以下簡稱“PCR實驗室”)的建設越來越得到重視,因為它對檢測結果的可靠性、準確性和安全性起到至關重要的作用。
PCR實驗室平面布局
臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混合物配制和擴增區、擴增產物分析區。為避免交叉污染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增反應混合物配制和擴增區→擴增產物分析區。各實驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
1.試劑貯存和準備區:此區域的作用是貯存試劑的制備、試劑的分裝、主反應混合液的制備。注意事項是實驗項目所使用的材料,如試劑與試劑原材料,標本與標本原材料等,這些都必須存放于本區內。至于是否需要控制氣流壓力,本區倒是沒有嚴格要求。
2.標本制備區:此區域的作用是臨床標本的保存、核酸(RNA與DNA)的提取與貯存、核酸加入至擴增反應管和測定RNA時DNA的合成。注意事項是為了防止鄰近區域的空氣進入本區,壓力梯度對比鄰近區域要設置成正壓。進行實驗項目的操作時,工作人員要避免不必要的走動,以防止加樣操作中發生氣溶膠污染。
3.擴增反應混合物配制和擴增區:此區域的作用是DNA擴增、把制備的實驗試劑做成反應混合液。注意事項是實驗擴增的污染指數比較高,壓力梯度對比鄰近區域要設置成負壓,這樣做的好處是能有效防止氣溶膠從本區泄漏。
4.擴增產物分析區:此區域的作用是測定相關擴增片段。注意事項是實驗室設計時如果已經預設了全自動封閉分析儀器,那么就沒有必要再劃分本區了。本區的壓力梯度對比鄰近區域要設置成負壓,這樣做的好處是能有效防止擴增產物擴散至其它區域。
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