1.陽(yáng)性質(zhì)控品
較常見(jiàn),發(fā)生概率在40%~60%之間;以重組質(zhì)粒作為陽(yáng)性質(zhì)控品,發(fā)生污染的概率更大;以構(gòu)建的假病毒或重組病毒作為陽(yáng)性質(zhì)控品,參與核酸提取的過(guò)程中,也容易發(fā)生氣溶膠污染;在試劑的配制過(guò)程中,接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液,核酸氣溶膠等,導(dǎo)致試劑被污染。這是目前實(shí)驗(yàn)室引起的核酸污染最主要原因。
2.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
尤其是第一代PCR技術(shù),發(fā)生概率在60%以上;PCR產(chǎn)物經(jīng)反復(fù)多次的擴(kuò)增,其復(fù)制量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)PCR的檢測(cè)極限。一個(gè)氣溶膠所包含的拷貝數(shù)可以在10^4~10^6copies,因此即使是極微量的污染也足以造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陽(yáng)性。但是,在采用了UNG/UDG防污染的PCR產(chǎn)品中,擴(kuò)增產(chǎn)物引起的污染概率降至10%左右。
PCR擴(kuò)增管的密封性是預(yù)防擴(kuò)增產(chǎn)物污染的關(guān)鍵。如果密封不嚴(yán),擴(kuò)增完成后有蒸發(fā)現(xiàn)象,液面不整齊,或者擴(kuò)增過(guò)程中有“炸管”聲音。
3.待測(cè)強(qiáng)陽(yáng)性樣品
發(fā)生概率在10%~30%之間。放置樣品的容器被污染或由于容器密封不嚴(yán)導(dǎo)致樣品與外界接觸被污染;待提取樣本中含有強(qiáng)陽(yáng)性樣本,其提取的樣品中含有高濃度的陽(yáng)性核酸,形成氣溶膠造成污染。
氣溶膠是由空氣與液體表面摩擦而產(chǎn)生的。開(kāi)蓋、晃動(dòng)、加樣器的反復(fù)抽吸等開(kāi)放式操作,形成核酸氣溶膠從而導(dǎo)致核酸污染。
以上核酸污染來(lái)源,均可形成氣溶膠擴(kuò)散至空氣中,或直接吸附到物體表面。因此,應(yīng)尤其重視由氣溶膠導(dǎo)致污染的問(wèn)題。重度污染假陽(yáng)性的ct值可在24左右,中度污染ct值在30左右;輕度污染ct值在33左右。
從核酸污染的分布來(lái)看主要在2個(gè)地方:
1、空氣中的核酸氣溶膠污染物:彌散到實(shí)驗(yàn)室各個(gè)角落,比較棘手;
2、物表的核酸污染物:移液器、離心機(jī)、核酸提取儀、傳遞窗、PCR儀、拆開(kāi)的試劑盒、槍頭盒、打開(kāi)的耗材等表面。
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